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十足目虹彩病毒1型(Decapod Iridescent Virus 1,DIV1)，又叫虾虹彩病毒，是近几年来威胁罗氏沼虾养殖产业的重要病害之一，可感染南美白对虾、罗氏沼虾、红螯螯虾等虾类，且具有不同的外观症状。其中，在罗氏沼虾上，最为典型的特征是额剑基部甲壳出现一块白色三角形区域，称为“白点”，部分虾有空肠空胃、肝胰腺萎缩等症状。在水产研究所长期性病原监测的过程中发现，虾虹彩病毒携带率较高，具有感染性强、致死率高的特点，且呈现出逐年增长的趋势。因此对十足目虹彩病毒1型的快速准确鉴定有重要意义。

1. 即开即用，用户只需要提供DNA样品。
   
2. 恒温扩增，反应设置更加简单。
   
3. 含荧光探针，可以对扩增进行实时荧光检测(需要荧光PCR仪)。
   
4. 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
   
5. 特异性高，根据十足目虹彩病毒1型保守序列设计的4条特异引物和1条探针，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
   
6. 一般30分钟内出结果，比PCR快。
   
7. 上样量大，对20μL的反应体系，最大样品加样量高达到14μL。
   
8. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
   
9. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
   
10. 提供内参，便于排除假阴性结果。

1. 本试剂盒仅可用于科研实验，严禁用临床诊断或其他医疗用途。
   
2. 本试剂盒只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。

1. 用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
   
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的样品阳性对照(1×10⁴拷贝/μL)和10μL内参阳性对照(1×10⁴拷贝/μL)加一定量的水作为核酸提取阳性对照样品，加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用10μL本试剂盒提供的10μL内参阳性对照(1×10⁴拷贝/μL)加一定量的水充当，加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。

3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加的两个反应分别是LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照。首次使用本试剂盒时，需要将Bst2.0 DNA聚合酶全部加入到4×Probe LAMP MasterMix中，轻柔颠倒混匀1分钟后再使用。未用完的部分需要放-20℃保存。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
   

   成分	N+2个样品管	LAMP阴性对照	LAMP阳性对照
   4×Probe LAMP MasterMix(含Bst2.0)	各5μL	5μL	5μL
   20×十足目虹彩病毒1型LAMP引物-探针混合液	各1μL	1μL	1μL
   N+2个样品DNA	各14μL	-	-
   超纯水	-	14μL	-
   十足目虹彩病毒1型LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL)			3.5μL
   十足目虹彩病毒1型LAMP内参对照(1×104拷贝/μL)	-	-	3.5μL

4. 如果使用荧光定量PCR仪，则设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集FAM通道和HEX通道的荧光信号。

5. 实验有效性的判断：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的FAM信号(对应样本)和HEX信号(对应内参)必须有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照的HEX信号(对应内参)必须有标准的S扩增曲线，LAMP阴性对照的FAM信号和HEX信号必须呈现一条平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果上述阳性对照和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。
   
6. 待测样品的结果判断：在实验有效的情况下，才有必要分析代测样品管的荧光信号。如果其FAM荧光信号曲线为S型(无论HEX信号如何)，则说明样品为阳性。如果FAM荧光信号为平线则说明待测样品为阴性。如果HEX荧光信号为S曲线，说明代测样品(FAM曲线)为真阴性。如果HEX荧光信号也是平线，说明此样品可能是假阴性，此样品需要重复测试。